Laboratoriumtoetse vir die diagnose van COVID-19 wat tans in die praktyk is, soos aanbeveel deur die internasionale liggame van kundiges, word hersien en geëvalueer.
Die COVID-19- siekte , wat in Wuhan, China, ontstaan het, het tot dusver meer as 208 lande geraak. Die wetenskaplike gemeenskap regoor die wêreld is die afgelope paar maande voor 'n aansienlike uitdaging gestel om diagnostiese toetse vir die opsporing van COVID-19- siektes te ontwikkel om pasiënte en vermeende individue te sif om die pandemie effektief te bestuur en te beheer.
Voordat ons die huidige metodes en praktyke wat vir die opsporing van COVID-19 gebruik word, evalueer, laat ons eers verstaan wat COVID-19 veroorsaak en hoe 'n mens diagnostiese toetse ontwikkel om pasiënte vir hierdie siekte te sif. COVID-19-siekte word veroorsaak deur 'n positief gestrande RNA- virus wat soönoties is, wat beteken dat hulle spesieversperrings van diere na mense kan oorsteek, en kan by mense siektes veroorsaak wat wissel van verkoue tot meer ernstige siektes soos MERS en SARS. Die virus wat COVID-19 veroorsaak, is nou deur die Internasionale Komitee vir Taksonomie van Virusse (ICTV) SARS-CoV-2 genoem, aangesien dit baie soortgelyk is aan die een wat die SARS-uitbraak veroorsaak het (SARS-CoV's). Die diagnostiese toets vir COVID-19-siekte kan op verskeie maniere ontwikkel word.
Die gewildste en tans mees toegepaste metode wêreldwyd is die ontwikkeling van 'n diagnostiese toets wat die SARS-CoV-2-virus self kan opspoor. Hierdie toets is gebaseer op die opsporing van die virale genoom in die pasiëntmonster deur RT-real-time PCR (reverse transcriptase-real-time Polimerase Chain Reaction). Dit behels die omskakeling van virale RNA na DNA met behulp van 'n ensiem genaamd reverse transcriptase en dan die amplifikasie van die DNA met behulp van 'n spesifieke stel primers en 'n fluoreserende probe, wat aan 'n spesifieke streek op die virale DNA bind, met behulp van 'n Taq-polimerase en die opsporing van die fluoreserende sein. Hierdie toetse word NAAT's (Nukleïensuur-amplifikasietoetse) genoem. Hierdie tegniek kan baie nuttig wees vir baie vroeë opsporing van die teenwoordigheid van nukleïensuur in die pasiëntmonster, selfs in asimptomatiese pasiënte wat nie COVID-19-siektesimptome toon nie (veral in die inkubasietydperk van 14-28 dae) en ook in die latere deel wanneer die siekte volskaal is.
Verskeie maatskappye regoor die wêreld het die afgelope paar maande in 'n wedloop teen tyd gewerk om NAAT-gebaseerde diagnostiese toets te ontwikkel vir die opsporing van SARS-CoV-2 gebaseer op CDC (Centre for Disease Control), Atlanta, VSA en WGO-riglyne ( 1, 2). Die gesondheidsowerhede regoor die wêreld het hierdie toetse goedgekeur vir noodgebruik vir die opsporing van SARS-CoV-2. Die virale gene wat tot dusver geteiken is, sluit die N-, E-, S- en RdRP-gene in, tesame met toepaslike positiewe en negatiewe kontroles. Die pasiëntmonsters wat vir so 'n toets versamel moet word, is van die boonste respiratoriese kanaal (nasofaryngeale en orofaryngeale depper) en/of onderste respiratoriese kanaal (sputum en/of endotrageale aspiraat of brongoalveolêre spoeling). Dit is egter ook moontlik om virus op te spoor in ander monsters, insluitend stoelgang en bloed. Die monsters moet vinnig op 'n gepaste wyse versamel word met al die nodige voorsorgmaatreëls en nakoming van bioveiligheidspraktyke (volgens riglyne neergelê deur die WGO[1]), van pasiënte wat aan die vermoedelike gevaldefinisie vir COVID-19 voldoen, dit bewaar en verpak. wel as dit na die diagnostiese sentrum vervoer moet word en dan verwerk word (onttrek RNA in 'n bioveiligheidskas in 'n BSL-2 of ekwivalente fasiliteit) vinnig op 'n manier om monster integriteit te verseker. Dit alles moet op 'n prioriteitsbasis uitgevoer word vir beter kliniese bestuur en uitbraakbeheer.
Die opsporingstyd vir verskeie beskikbare NAAT-gebaseerde toetse wat deur groot diagnostiese maatskappye regoor die wêreld ontwikkel is, wissel van 45 min tot 3.5 uur. Verskeie verbeterings word aan hierdie toetse aangebring om dit in versorgingspunttoetse om te skakel en die gewenste resultate in so minder tyd as moontlik te behaal sonder om die akkuraatheid van die resultaat in te boet, om die aantal toetse wat op 'n dag gedoen kan word, te vermeerder.
Ander diagnostiese toetsopsies is vinnige diagnostiese toetse (RDT's) wat óf virale antigene/proteïene opspoor wat op die oppervlak van die SARS-CoV-2-virusdeeltjies uitgedruk word soos hulle in gasheerselle repliseer en siekte veroorsaak, óf gasheer-teenliggaampies in reaksie op infeksie opspoor; hierdie toets bespeur die teenwoordigheid van teenliggaampies in die bloed van mense wat vermoedelik met COVID-19 besmet is (3).
Die akkuraatheid en reproduseerbaarheid van RDT om virale antigene op te spoor hang af van verskeie faktore, insluitend die tyd vanaf die aanvang van siekte, die konsentrasie van die virus in die monster, die kwaliteit en verwerking van die monster, en die formulering van die reagense teenwoordig in die toetsstelle. As gevolg van hierdie veranderlikes kan die sensitiwiteit van hierdie toetse wissel van 34% tot 80%. 'n Groot nadeel van hierdie opsie is dat die virus in sy replikatiewe en infektiewe stadium moet wees om die virale proteïene op te spoor.
Net so is toetse wat gasheer-teenliggaampies opspoor gebaseer op die sterkte van teenliggaampiesreaksie wat afhang van faktore soos ouderdom, voedingstatus, erns van die siekte, en sekere medikasie of infeksies wat die immuunstelsel onderdruk. ’n Groot nadeel van hierdie opsie is dat teenliggaampies oor dae tot weke ná infeksie met die SARS-CoV-2-virus geproduseer word en ’n mens moet so lank wag om die toets uit te voer. Dit beteken dat 'n diagnose van COVID-19-infeksie gebaseer op gasheer-teenliggaampaksies dikwels eers in die herstelfase moontlik sal wees, wanneer baie van die geleenthede vir kliniese intervensie of voorkoming van siekteoordrag reeds verby is.
Tans is die RDT's wat hierbo genoem is, slegs in 'n navorsingsomgewing goedgekeur en nie vir kliniese diagnose nie as gevolg van die gebrek aan data (3, 4). Soos meer en meer epidemiologiese data vir COVID-19 beskikbaar word, sal meer RDT's ontwikkel en goedgekeur word as punt-van-sorg-toetse in 'n kliniese omgewing, aangesien dit resultate kan lewer binne 10-30 minute in teenstelling met NAAT-gebaseerde toetse wat gemiddeld neem paar uur om die siekte op te spoor.
***
Verwysings:
1. WIE, 2020. Laboratoriumtoetsstrategie-aanbevelings vir COVID-19. Tussentydse leiding. 21 Maart 2020. Aanlyn beskikbaar by https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf Toegang op 09 April 2020
2. CDC 2020. Inligting vir laboratoriums. Tussentydse leiding vir laboratoriums Aanlyn beskikbaar by https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html Toegang op 09 April 2020.
3. WIE, 2020. Advies oor die gebruik van punt-van-sorg-toetse. Wetenskaplike opdrag. 08 April 2020. Aanlyn beskikbaar by https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 Toegang op 09 April 2020.
4. ECDC, 2020. 'n Oorsig van die vinnige toetssituasie vir COVID-19-diagnose in die EU/EEA. 01 April 2020. Europese Sentrum vir siektevoorkoming en -beheer. Aanlyn beskikbaar by https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea Toegang op 09 April 2020
***
